食品的氨基酸含量的测定?
1.原理
在用盐酸水解蛋白质的过程中,胱氨酸易被破坏,现多采用过甲酸氧化法将蛋白质中的胱氨酸及半胱氨酸氧化成半胱磺酸,其反应如下:
SH NH2 O SO3H NH2 O
CH2 CH COOH+3H C OOH CH2 CH COOH+3H C OH
半胱氨酸 过甲酸 半胱磺酸 甲酸
生成的半胱磺酸可在氨基酸自动分析仪上进行测定,与标准半胱磺酸比较,计算其含量。
2.适用范围
参照中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所编写的食物营养成分测定法第三版。适用于食物中胱氨酸的测定。
3.仪器
水解瓶:耐压螺盖玻璃管或硬质试管,体积20~30mL,用去离子水冲净并烘干,电热减压蒸发器。
4.试剂
过甲酸:取9mL分析纯甲酸加入1mL30%过氧化氢混合,在室温放置2小时以上。
5.操作步骤
5.1过甲酸氧化:称取一定量的食物样品置于水解瓶中,使样品含蛋白质在5~10mg,加入1mL过甲酸试剂,在室温放置3小时。加1mL乙醇终止氧化。将样品瓶置于电热减压器中,于45℃减压蒸干,用1mL去离子水淋洗瓶壁,再蒸干,反复3次,以除去过甲酸。
5.2盐酸水解:同食物中氨基酸(16种)测定方法
5.3在Bekman6300氨基酸自动分析仪上,在注文50℃时用pH3.25柠檬酸缓冲液洗脱,半胱磺酸的出峰时间约在1.78分钟。
6.计算
上机样品液(50μl)中半胱磺酸量=
上机标准液中半胱磺酸量(nmol)×样品峰面积
半胱磺酸标准峰面积
100g样品中胱氨酸mg数=
上机样品中半胱磺酸量(nmol)×D×M×100
W×E×106×2
式中
D:样品稀释倍数
M:胱氨酸分子量(ng)
W:称样量(g)
E:上机时的进样量(此处为50μl)
鲜肉中游离氨基酸的测定
含氮浸出物包括核苷酸、肌苷、游离氨基酸和嘌呤碱等。浸出物的成分与肉的风味和滋味有密切的关系,尤其是含氮浸出物的含量对肉汤厚鲜味道的影响很重要,浸出物一般可
游离氨基酸鲜肉
含氮浸出物包括核苷酸、肌苷、游离氨基酸和嘌呤碱等。浸出物的成分与肉的风味和滋味有密切的关系,尤其是含氮浸出物的含量对肉汤厚鲜味道的影响很重要,浸出物一般可
测定氨基酸含量的方法有几种
1)称干重法.可用离心法或过滤法测定.优点:可适用于一切微生物,缺点:无法区别死菌和活菌.
2)比浊法.原理:由于微生物在液体培养时,原生质的增加导致混浊度的增加,可用分光光度计测定.优点:比较准确.
3)测含氮量,大多数微生物的含氮量占干重的比例较一致,根据含氮量再乘以6.25即可测得其粗蛋白的含量.
4)血球计数板法.优点:简便、快速、直观.缺点:结果包括死菌和活菌.
5)液体稀释法.对未知菌样作连续的10倍系列稀释,经培养后,记录每个稀释度出现生长的试管数,然后查MPN表,再根据样品的稀释倍数就可计算其中的活菌含量.优点:可计算活菌数,较准确.缺点:比较繁琐.
6)平板菌落计数法.取一定体积的稀释菌液涂布在合适的固体培养基,经培养后计算原菌液的含菌数.优点,可以获得活菌的信息.缺点:操作繁琐,需要培养一定时间才能获得,测定结果受多种因素的影响.
氨基酸的检测方法有哪些
1. 分光光度法氨基酸检测:主要是利用氨基酸与衍生剂发生化学反应,产生蓝紫色化合物,该化合物在某一波长处有最大吸收峰,根据吸收值大小得到氨基酸含量。常用的衍生剂为茚三酮。
2. 毛细管电泳法氨基酸检测:根据分离原理的不同,可分为毛细管区带电泳、毛细管凝胶电泳、毛细管等电电泳、毛细管等速电泳以及胶束电动力学毛细管电泳。其中,毛细管区带电泳和胶束电动力学毛细管电泳可用于氨基酸检测。
3. 近红外光谱法氨基酸检测:利用有机化合物的含氢基团在特定波长区域跃迁,产生光谱的变化,结合统计学方法间接地实现氨基酸的定量检测。
4. 气相色谱法氨基酸检测:将氨基酸衍生化处理变为容易气化的物质,根据气态样品中各组分在流动相和固定相中的分配系数的不同,实现对氨基酸的定量分析。
5. 高效液相色谱法氨基酸检测:是最常用的一种氨基酸检测方法。由于大多数氨基酸本身没有紫外吸收和荧光反应,因此需要对样品进行衍生化处理将其转化为有紫外吸收和发射荧光的物质,衍生可分为柱前衍生和柱后衍生。
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