铁离子螯合实验（亚铁离子螯合能力实验原理）

络合铁的测定方法

甘薯中是含有络合铁（NaFeEDTA）的。

NaFeEDTA是一种性质稳定的络合型铁强化剂，生物利用率高，不易受食物中铁吸收抑制因子的影响，对食物载体色泽、口感等感官指标的影响较小，被认为是目前最具前景的铁营养补充剂。

因此，研究一种直接准确测定酱油中NaFeEDTA含量的方法对铁强化酱油质量控制和市场监测有着极为重要的意义。

但是，现有的测定方法中，原子吸收分光光度法只能测定铁强化酱油中总的铁的含量，而直接用紫外吸收分光光度法扣除本底测定时[1]，酱油中的防腐剂、氨基酸类、核酸类、色素及其他有机酸类等物质在紫外光区都有较强的吸收，势必干扰测定结果，并且需要有强铁化酱油造成方法的局限性。本研究希望获得一种既可消除各种游离铁的干扰，又可将空白酱油本身的颜色干扰扣除的快速测定铁强化酱油中NaFeEDTA含量的有效方法。

1. 材料与方法

1.1 仪器试剂

1.1.1 仪器 上海分析仪器厂UV-756CTR型紫外可见分光光度计

1.1.2 试剂 对照品：NaFeEDTA （sigma公司），硫氰酸氨、过硫酸氨、浓盐酸、甲醇、乙醇、丙酮、三氯化铁、硝酸铁（所有试剂均为分析纯）。

显色剂的配制： 称取硫氰酸氨75g，置100ml 棕色容量瓶中，加水250ml溶解后家丙酮75ml，用水稀释至刻度，摇匀[2]。

NaFeEDTA对照品溶液的配置：精密称取NaFeEDTA对照品约200mg，置100ml 棕色容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀。

稀盐酸配制：取盐酸500ml ， 加水稀释至1000ml,摇匀。

1.2分析

1.2.1 标准曲线的绘制 精密量取NaFeEDTA对照品溶液0、1、2、3、4、5、

6ml分别置于50ml 容量瓶中，加75%的甲醇溶液定容，摇匀。精密量取稀释后的不同浓度的对照品溶液5ml 分别置于50ml容量瓶中，加水5.00ml ，加显色剂15ml ，用无水乙醇定容，摇匀，在λ=480nm处分别测定其吸光度A0，再分别精密测量取不同浓度标准品溶液5ml于50ml 容量瓶中，加稀盐酸5.00 ml ，加显色剂15ml，用无水乙醇定容，摇匀，在λ=480nm处分别测定其吸光度A，计算不同浓度ΔA=A- A0 ,以浓度C为横坐标，ΔA为纵坐标绘制标准曲线，结果如图（1）：

线型范围为4~20μg/ml（以NaFeEDTA含量计），计算线性回归方程为：

ΔA=0.0349C ，相关系数为0.9999，线性关系良好。

1.2.2 样品测定 取铁强化酱油样品3.00ml置于50ml容量瓶中，加75%甲醇溶液定容，醇沉30min后过滤，取续滤液5.00ml两份，分别置于两个50ml 的容量瓶中，其中一个容量瓶中加水5.00ml 、过硫酸氨100mg ，显色剂硫氰酸氨15mg，加无水乙醇定容，摇匀后测定吸光度A样0 然后向另一个容量瓶中加稀盐酸5.00ml，过硫酸氨100mg,显色剂15ml，加无水乙醇定容后，摇匀，测定吸光度A样0 。计算ΔA=A样 – A样0 ，并与对照品ΔA对照 = A对照- A对照0 比较，C样=C对照* （ΔA样 /ΔA对照）即可得到样品中NaFeEDTA的含量。

2 结果与讨论

2.1 实验条件

2.1.1 测定波长的选择 将NaFeEDTA对照品配成浓度为15μg/ml的溶液，显色后，在400~600nm波长范围内扫描，如图（2）：

实验结果表明，此红色络合物在λ=480nm处有最大的吸收，与潘教麦报道一致[3]

2.1.2 酸度对显色灵敏度的影响 由于NaFeEDTA只有在一定的酸性条件下才能离解出来Fe3+ 本方法采用盐酸（取盐酸50ml , 加水稀释至100ml）来调节酸度，并考察了加入不同量的盐酸对显色灵敏度的影响，结果如图（3）：

根据图显示的实验结果，盐酸加入量应该大于4.00ml（pH≤0.5, 在此实验条件下，NaFeEDTA中的铁完全解离生成三价铁离子，本实验采用的盐酸加入量为5.00ml。

2.1.3 显色剂加入量考察

在样品测定条件下，显色前分别加入0、5、10、15、20ml显色剂，分别测定不同条件下ΔA，考察显色剂加入量对测定结果的影响。实验结果如图（4）：

根据实验结果，本实验显色剂的加入量为15ml。

2.1.4 显色产物稳定性 在样品测定条件下，显色后分别放置不同的时间，测定其吸光度，通过实验发现，在室温下，红色络合物在30min内，吸光度值基本无变化，在实验室中我们还发现酸性条件下，当温度升高时，显色后生成的红色络合物红色褪去速度加快，灵敏度降低，所以，样品测定时温度不宜太高。

2.2 样品回收率

表1是用标准加入法对虎王牌酱油做的回收率实验，回收率在95.0%~110.0%之间，表明该方法测定结果可靠。

2.3 样品测定的重现性

精密量取虎王牌铁强化酱油6份，每份3ml，按照样品测定法测定ΔA 样

分别为0.450、0.458、0.455、0.452、0.449、0.454，平均值为0.453，RSD=0.8%，实验结果表明该方法的重现性良好。

表1：酱油中NaFeEDTA回收率测定结果

Table 1 NaFeEDTA recovery measurement in soy sauce

编号 标准加入量(mg/ml) 测定值（mg/ml） 回收率（%）

1 1.00 95.0 95.0

2 1.00 1.07 107.0

3 2.00 2.10 105.0

4 2.00 2.20 110.0

5 3.00 3.15 107.3

6 3.00 3.21 107.0

2.4 不同品种的铁强化酱油中NaFeEDTA的含量测定

用此方法对不同品种的铁强化酱油进行了测定，测定结果与添加量基本相符。测定结果见表2

表2：不同品种的铁强化酱油中NaFeEDTA的含量测定

Table 2 NaFeEDTA contents of different soy sauce samples

样品种类 NaFeEDTA加入量（mg/ml） 测定值(mg/ml)

珍极牌 2.00 1.95

海天牌 2.00 2.16

北康牌 2.00 1.88

和田宽 2.00 1.95

家乐牌 2.00 1.94

虎王牌 2.00 2.07

2.5 讨论

2.5.1 醇沉条件的考察 由于酱油本身的颜色太深，所以，样品测定前先醇沉。实验考察了甲醇浓度及醇沉时间对回收率的影响。实验结果见表3及表4。

表3：

用不同浓度的甲醇醇沉后样品中NaFeEDTA的回收率

Table 3 NaFeEDTA recovery after precipitation by different alcohol amounts

甲醇浓度（%） 酱油本底吸光度 样品回收率（%）

30 0.343 109.4

60 0.240 101.2

75 0.159 107.0

90 0.095 91.7

理论上在对样品进行醇沉时，甲醇浓度越大醇沉效果越好，但是，由于NaFeEDTA在甲醇中的溶解度低，所以，醇沉时水的比例不能太小，根据表3的实验结果可知，用75%的甲醇效果最佳。

根据表4的实验结果，我们将醇沉时间定为30min。

2.5.2 显色时溶剂的选择 由于样品显色后生成的红色络合物在丙酮、乙醇等有机溶剂中的稳定性好，灵敏度高，所以，选择在乙醇中显色[1]。

表 4 不同醇沉时间样品中NaFeEDTA 的回收率

Table 4 NaFeEDTA recovery in different precipitation times by alcohol treatment

醇沉时间（min） 30 60 120

样品回收率（%） 100.5 102.1 101.9

2.5.3 样品中NaFeEDTA 含量计算 在实验中 ，发现游离的铁离子，在中性和酸性条件下均可与硫氰酸氨生成红色络合物，而NaFeEDTA只有在酸性的条件下才可以与硫氰酸氨生成红色络合物[4]，所以，在中性条件下可测定游离铁的含量，在酸性（pH≤0.5）条件下可测定总铁的含量，铁强化酱油中总铁的量减去游离铁的含量即为样品中的NaFeEDTA的含量。

[参考文献]：

[1]苗虹，于波，霍军生，等。食品添加剂NaFeEDTA测定方法研究。食品科学，2000，21（8）：48-50

[2] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典二部 . 北京： 化学工业出版社，2000，116-117

[3] 潘教麦， 陈亚森， 严恒太 . 显色剂及其在光度分析中的应用. 上海 : 上海科学技术出版社，1982，51-56

[4] 于如* . 分析化学. 北京： 人民卫生出版社， 1989，161-162

甘薯原料在工艺上的优点：在酒精生产中，甘薯原料的出酒率较高。其优点是：首先甘薯的淀粉纯度高（可用2%盐酸转化，测定其中所含淀粉，与用同样方法测定别的原料比较，甘薯的淀粉纯度高 ）。其次是甘薯的结构松脆，易于蒸煮糊化，为以后的糖化发酵创造有利条件。

甘薯是高淀粉作物。在相同条件下，单位面积淀粉产量比水稻高30.1％，比玉米高30.6％，比小麦高48.9％。而且每生产500公斤甘薯淀粉所需要的投资比水稻少25％，比玉米少20％，生产加工淀粉的竞争优势很强。河北省卢龙县种植甘薯并加工淀粉，每亩纯收入1500元，收益是种植其它作物的3倍多。目前利用甘薯进行深加工最多的产品还有酒精、葡萄糖和柠檬酸等。甘薯原料需要量很大。

铁离子螯合物在什么样的条件下会沉淀，如何使其在强碱性条件下不生成沉淀？？

抑制得不够，三价铁的水解能力强，根据实验显示,pH在4.7时(差不多)Fe(OH)3便可沉淀完全

感觉这样的提问没有意义

建议自己下去查查资料

EDTA络合滴定铝离子、铁离子的方法及原理

EDTA测铁：Fe3++Y=FeY，指示剂：磺基水杨酸

EDTA测铝：因为EDTA和铝配合较慢，而且副反应多，因此采用返滴定法：将待测铝溶液和一定量过量EDTA标准溶液煮沸数分钟，然后加入缓冲溶液用标准锌溶液返滴定过量的EDTA。

络合滴定法：以络合反应为基础的滴定分析方法称为络合滴定法。

在络合反应中，提供配位原子的物质称为配位体，即络合剂。无机络合剂：⑴无机络合剂的分子或离子大都是只含有一个配位原子的单齿配位体，它们与金属离子的络合反应是逐级进行的；

⑵络合物的稳定性多数不高，因而各级络合反应都进行得不够完全；

⑶由于各级形成常数彼此相差不大，容易得到络合比不同的一系列络合物，产物没有固定的组成，从而难以确定反应的计量关系和滴定终点。

⑴有机络合剂分子中常含有两个或两个以上的配位原子，称之为多齿配位体。

⑵与金属离子络合时可以形成具有环状结构的螯合物，在一定的条件下络合比是固定的。

⑶生成的螯合物稳定，络合反应的完全程度高，能得到明显的滴定终点。

鳌合铁的颜色

二价铁离子EDTA颜色为淡绿色到棕绿色.

三价的颜色为咖啡色或土黄色,颜色比二价更深.

从现象来看,应该是有部分二价铁离子氧化为了三价铁离子.

操作方法没有错误,EDTA和FeSO4混合前,EDTA要冷至室温.FeSO4要现用现配,或配过之后要密封,如果有铁粉就在配制后加点铁粉.