测定氨基酸含量的方法有几种
1)称干重法.可用离心法或过滤法测定.优点:可适用于一切微生物,缺点:无法区别死菌和活菌.
2)比浊法.原理:由于微生物在液体培养时,原生质的增加导致混浊度的增加,可用分光光度计测定.优点:比较准确.
3)测含氮量,大多数微生物的含氮量占干重的比例较一致,根据含氮量再乘以6.25即可测得其粗蛋白的含量.
4)血球计数板法.优点:简便、快速、直观.缺点:结果包括死菌和活菌.
5)液体稀释法.对未知菌样作连续的10倍系列稀释,经培养后,记录每个稀释度出现生长的试管数,然后查MPN表,再根据样品的稀释倍数就可计算其中的活菌含量.优点:可计算活菌数,较准确.缺点:比较繁琐.
6)平板菌落计数法.取一定体积的稀释菌液涂布在合适的固体培养基,经培养后计算原菌液的含菌数.优点,可以获得活菌的信息.缺点:操作繁琐,需要培养一定时间才能获得,测定结果受多种因素的影响.
可以用紫外分光光度法对氨基酸,蛋白质进行定量分析吗
可以,而且实际上也是这么干的。
不过用紫外分光光度法来分析有两种,一种是直接把蛋白质或氨基酸溶液在od280下看峰,高级一点的如nanodrop这种机器就可以直接给出蛋白浓度,但这种方法极易受到抽提蛋白时去污剂的影响而出现严重偏差,所以如果是在缓冲液中的纯蛋白是可以这么检测定量的,比如买来的抗体就会提供od280的数值来计算浓度。
实际中常用的几种蛋白定量是将蛋白或氨基酸的溶液与某些化学物质反应(如bca法、broadford法等)后在上紫外分光光度计测量od值,用标准蛋白如bsa做一个标准曲线,再将未知蛋白测得的od与标曲进行比较测得准确的浓度,在一定的浓度范围内,这些方法的准确性很高。
茚三酮显色法测定氨基酸含量的步骤?
茚三酮显色法步骤:
1.标准曲线的制作
分别取0.3mmol/L
的标准氨基酸溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL
于试管中,用水补足至1mL。各加入1mL
pH5.4,2mol/L
醋酸缓冲液;再加入1mL
茚三酮显色液,充分混匀后,盖住试管口,在100℃水浴中加热15min,用自来水冷却。放置5min
后,加入3mL60%乙醇稀释,充分摇匀,用分光光度计测定OD570nm。(脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄色,应测定OD440nm)。
以OD570nm
为纵坐标,氨基酸含量为横坐标,绘制标准曲线。
实验室培养箱(CO2
培养箱)
生物帮上面有这方面的详细的介绍。
如何检测氨基酸的纯度
一般是测透光率
分光光度计测定:每个公司有自己的测定标准
一般来说
工业级:透光率达到92%—95%
食品级要达到:95%—98%
有的通过超滤膜的氨基酸的透光率甚至测定时99%或1
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