什么是定点突变
定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征，是基因研究工作中一种非常有用的手段。 体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于人类了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构/结构域。而利用定点突变技术改造基因：比如野生型的绿色荧光蛋白（wtGFP）是在紫外光激发下能够发出微弱的绿色荧光，经过对其发光结构域的特定氨基酸定点改造，现在的GFP能在可见光的波长范围被激发（吸收区红移），而且发光强度比原来强上百倍，甚至还出现了黄色荧光蛋白，蓝色荧光蛋白等等。定点突变技术的潜在应用领域很广，比如研究蛋白质相互作用位点的结构、改造酶的不同活性或者动力学特性，改造启动子或者DNA作用元件，提高蛋白的抗原性或者是稳定性、活性、研究蛋白的晶体结构，以及药物研发、基因治疗等等方面。
如何做磷酸化氨基酸位点的突变
根据以前所看的文献,磷酸化位点通常是丝氨酸和苏氨酸,可以将这些氨基酸利用定点诱变的方式突变为丙氨酸或谷(天冬)氨酸,从而将原有的磷酸化位点失活或持续保持活性(模拟组成型磷酸化),respectively.
另外需要注意的是,你所研究的目标蛋白往往具有多个磷酸化位点,而其中只有特定的一个或几个磷酸化位点参与你所要研究的活性,
利用重组PCR，把Ser Thr突变为Ala，表达，然后测序即可，剩下的就是常规的实验了
怎么确定基因中的突变位点和氨基酸的改变
是一定的。生物是否进化就是看这个生物种群的基因频率是否改变。基因发生了突变但是性状没有发生改变，是因为3个碱基确定1个氨基酸，而氨基酸只有20种，碱基A、T、G、C，3个一组互相结合有64种其中有3种是终止密码，其他的则是氨基酸。既是说碱基对氨基酸是1对1的，但是氨基酸对碱基是1对多的。如：一段基因是GCCTACGCAGTCACT其中第二个C突变成了G，但是它所决定的氨基酸种类是不变的，所以它的性状没有发生改变。
如何分析氨基酸序列中的突变位点
将两条氨基酸的序列的各种性质做一个比较，比如疏水性呀，等电点呀，看看有没有明显的变化；另外将不同物种同源序列做个聚类，看看该突变的位点是否处于很保守的位置，如果是的话，该突变可能对结构和功能有较大的影响。其实真正阐述蛋白质功能变化的话，还必须通过实验，而且工作还多的很。
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