氨基酸定性（氨基酸定性鉴定的原理）

如何用纸层析法对氨基酸进行定性测定

纸层析法（paper

chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术,可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定.纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法,其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相,展层用的有机溶溶剂是流动相.在层析时,将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处,该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层,这样混合氨基酸在两相中不断分配,由于分配系数（Kd）不同,结果它们分布在滤纸的不同位置上.物质被分离后在纸层析图谱上的位置可用比移值（rate

of

flow,Rf）来表示.所谓Rf,是指在纸层析中,从原点至氨基酸停留点（又称为层析点）中心的距离（X）与原点至溶剂前沿的距离（Y）的比值：

在一定条件下某种物质的Rf值是常数.Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、温度、湿度、层析滤纸的型号和质量等因素有关.

如何用纸层析法对氨基酸进行定性和定量的测定

1、在滤纸条上端边缘约1厘米的中央剪一小孔。

2、将滤纸条平放于洁净的纸上，在距离滤纸下端25px处用铅笔轻画一横线，并在横线的中央画一直径为2mm的小圆圈。

3、用毛细管吸取氨基酸混合液，在滤纸条下端的小圆圈内点样。

4、取干燥大试管，加入被水饱和的酚溶液10ml，注意勿使溶液沾到试管壁上，将试管垂直固定在距滤纸条下端12.5px处穿大头针。从滤纸条上端小孔处穿棉线并左右分开，调节线的高度使滤纸垂直悬于试管内且下湍浸入溶液12.5px，注意勿使点样点浸入溶液中，亦勿使滤纸条接触试管壁。

5、此时即可看到溶剂向上移动，溶剂升到一定高度时，小心将纸条取出，以铅笔标出溶剂上升的前沿。

6、将滤纸条两端，用大头针钉在小木框上，吹干后用喷雾器均匀地喷一层0.2%茚三酮乙醇溶液，然后再将滤纸条吹干，即可看到纸上显出三色点，每个色点代表一种氨基酸。

在层析时，将样品点在距滤纸一端约2～3cm的某一处，该点称为原点；然后在密闭容器中层析溶剂沿滤纸的一个方向进行展层，这样混合氨基酸在两相中不断分配，由于分配系数不同，结果它们分布在滤纸的不同位置上。

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，其中滤纸纤维素上吸附的水是固定相，展层用的有机溶溶剂是流动。

扩展资料：

在滤纸纤维上吸附着一层水保持成为固定相，另一部分是能溶于水的有机溶剂，如苯酚或正丁醇作为流动相，它沿着滤纸长的方向向上或向下流动。

氨基酸的亲脂性愈强，则与有机溶剂一起移动的倾向愈大; 氨基酸的亲水性愈强，则被保留在固定相中的趋势愈大。

以纸为载体的色谱法。固定相一般为纸纤维上吸附的水分，流动相为不与水相溶的有机溶剂；也可使纸吸留其他物质作为固定相，如缓冲液，甲酰胺等。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。

当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。

用斑点扫描仪或将组分点取下，以溶剂溶出组分，用适宜方法定量（如光度法、比色法等）。

参考资料来源：百度百科-氨基酸纸层析法

百度百科-纸层析法

利用氨基酸的rf值能否对氨基酸进行定性？

标准氨基酸的Rf值表怎么判断氨基酸的Rf是酸相还是碱相： 1、—NH2能够水解，与H2O反应生成—NH3＋和OH－，从而显示出碱性； 2、—COOH能够电离，在水中生成—COO－和H＋，从而显示出酸性； 3、氨基酸必须至少带有一个—COOH和一个—NH2，所以如果带正电，说明—NH3＋多一点，显碱性；如果带负电，—COO－更多，显酸性。

氨基酸的定性鉴定原理

实验原理：

纸层析法（paper chromatography）是生物化学上分离、鉴定氨基酸混合物的常用技术，可用于蛋白质的氨基酸成分的定性鉴定和定量测定。

纸层析法又称纸色谱法，是用滤纸为支持物，所用展层溶剂大多由水和有机溶剂组成，滤纸纤维与水的亲和力强，与有机溶剂的亲和力弱，因此在展层时，纸纤维上吸附的水分是固定相，有机溶剂是流动相。溶剂由下向上移动的，称上行法；由上向下移动的，称下行法。将样品点在滤纸上(此点称为原点)，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。

由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点距离不等的层析点。

引申：

氨基酸的定性鉴别：紫外吸收光谱法 

精密称取酪氨酸、色氨酸、苯内氨酸各适量，分别用水制成1ml含20μg（色氨酸）、40μg（酪氨酸）、200μg（苯丙氨酸），在波长230~300nm测定各氨基酸的吸收光谱。 在20种天然氨基酸中，只有酪氨酸、色氨酸和苯内氨酸，在紫外区最大吸收，酪氨酸的最大吸收峰的波长275nm处，色氨酸的最大吸收峰在波长280nm处，同时在波长288nm处有一个肩峰，苯丙氨酸最大的吸收峰在波长258nm处，同时在257nm和264nm处有两个较小的吸收峰。由此可见，这三种氨基酸可以通过紫外吸收光谱加以鉴别。