氨基酸态氮测定方法（氨基酸态氮测定方法有几种）

调味料中氨基酸态氮检测具体步骤？急！！！

电位甲醛滴定法【酱油卫生标准的分析方法Method for analysis of hygienic standard of soybean sauce】（第一法甲醛值法）

（一）原理

氨基酸有氨基及羧基两性基团，它们相互作用形成中性内盐，利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出来酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，根据酸度计指示pH值，控制终点。

R—CH—COOH——→R—C—C=O

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NH2 H3N—O

R—CH—COOH+HCHO——→R—CH—COOH

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NH2 NH—CH2OH

R—CH—COOH +NaOH=R—CH—COONa

∣ ∣

NH—CH2OH NH—CH2OH

（二）试剂

1、甲醛（36%）：应不含有聚合物。

2、氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]

（三）仪器

1、pHS—25型酸度计：包括标准缓冲溶液和KCL饱和溶液；

2、20mL移液管；3、10mL微量滴定管；4、100mL容量瓶；

5、250mL烧杯；

（四）测定方法

1、吸取5.0mL试样，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，备用。

2、吸取上述稀释液20.00mL置于200mL烧杯中，加水60mL水，插入电极，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数，（可计算总酸含量）。

3、向上述溶液中准确加入10.0mL甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]继续滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数。

4、取80mL水，先用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，再加入10.0mL甲醛溶液，混匀,再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数。

（五）结果计算

试样中氨基酸态氮的含量为：

式中：X—试样中氨基酸态氮的含量，g/100Ml；

V1—测定用试样稀释液加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL；

V2—测定空白试验加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL；

C—氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；

0.014—与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=1.000mol/L]相当的氮的质量，g；

（六）注意事项

1、加入甲醛后放置时间不宜过长，应立即滴定，以免甲醛聚合，影响测定结果。

2、由于铵离子能与甲醛作用，样品中若含有铵盐，将会使测定结果偏高。

3、计算结果保留两位有效数字。精密度:在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%

青贮饲料中氨态氮的测定方法

一、目的与原理：

1、了解掌握单指示剂与双指示剂甲醛滴定法测氨态氮总量的方法与原理：

二、单指示剂甲醛滴定法：

(一)原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示酸性，又含有-NH2基显示碱性。由于这二个基的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，-NH2与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。

（二）试剂

(1)40％中性甲醛溶液，以麝香草酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。

(2)0.1％麝香草酚酞乙醇溶液。

(3)0.100N氢氧化钠标准溶液。

(三)操作步骤：

称取一定量样品(约含20毫克左右的氨基酸)于烧杯中(如为固体加水50毫升)，加2-3滴指示剂，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。加入中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。再用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计算

计算：

氨基酸态氮(％)=( N V×0.014×100)/W

式中：

N：NaOH标准溶液当量浓渡。

V：NaOH标准溶液消耗的总量(m1)

W：样品溶液相当样品重量(克)。

0.014：氮的毫克当量。

三、双指示剂甲醛滴定法：

(一)原理：

与单色法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法(此法操作复杂，不作介绍)相近单色滴定法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液PH值作为麝香草酚酞的终点。PH值在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的PH值作为中性红的终点，PH值为7.0，从理论计算看，双色滴定法较为准确。

(二)试剂：

(1)三种试剂同单指示剂法

(2)0.1％中性红(50％乙醇溶液)

(三)操作步骤：

取相同的两份样品，分别注入100毫升三角烧瓶中， 一份加入中性红指示剂2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定终点(由红变琥珀色)，记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，摇匀，以0.100NNaOH准溶液滴定至淡蓝色。按下述公式计算。

计算：

氨基酸态氮(％)=( N(V2-V1)×0.014)/W×100

式中：

V2：用麝香草酚酞为指示剂时标准碱液消耗量(毫升)

V1：用中性红作指示剂时碱液的消耗量(m1)。

N：标准碱液当量浓度。

W：样品的重量(克)。．

0.014：氮的毫克当量。

注意事项：

测定时样品的颜色较深，应加活性炭脱色之后再滴定．

?氨基酸态氮含量测定终点为什么是pH=9.2?

氨基酸态氮含量测定终点是pH=9.2的原因：溶液中氨基态氮中的羧基与氢氧化钠标准溶液完全反应后的PH值。

校正PH计，吸取试样A毫升（氨基态氮的含量为1～5mg）于烧杯中，加5滴30%过氧化氢，将烧杯置于电磁搅拌器上，电极插入烧杯内试样中适当位置。如需要加适量蒸馏水。

本实验用的是PH为8.2和9.2数据。由于酱油还含有总酸度，为了测定有效酸度，需要先获取总酸度。用PH＝8.2时氢氧化钠消耗的体积（对应总酸度）与PH＝9.2时氢氧化钠消耗的体积的差，可计算出样品中氨基态氮含量。

鉴别方法

氨基酸态氮指的是以氨基酸形式存在的氮元素的含量。氨基酸态氮是判定发酵产品发酵程度的特性指标。该指标不达标，主要是由于生产工艺不符合标准要求，产品配方缺陷或者是产品与已制定指标不匹配等原因造成的。

该指标越高，说明酱油中的氨基酸含量越高，鲜味越好。酱油中氨基酸态氮最低含量不得小于0.4g/100ml。要想买到合适的酱油，首先要看标签。从酱油的原料表中可以看出，其原料是大豆还是脱脂大豆，是小麦还是麸皮，可知其原料档次的高低。看清标签上标注的是酿造酱油还是配制酱油。