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检验氨基酸用什么方法?
你若是问蛋白质,我可以直接告诉你又双缩脲试剂(中学阶段),但氨基酸的检验比蛋白质麻烦多了。 一、氨基酸的分离和检测氨基酸的分离和检测手段,以往用化学分析法、层析法、比色法、气相色谱法、氨基酸自动分析仪。随着高效液相色谱及填料的发展,HPLC在氨基酸检测方面显示了其特有的优越性。但大多数氨基酸无紫外吸收和荧光发射特性,为提高分析检测灵敏度和分离选择特性,通常将氨基酸衍生,衍生方式有柱前衍生法与柱后衍生法。HPLC与各种衍生相结合的氨基酸分析技术,构成了具有广泛适用性的现代氨基酸分析技术。
二、鉴定是哪种氨基酸,不同的氨基酸要用不同的方法。1、茚三酮反应 (ninhydrin reaction) 茚三酮(弱酸环境加热) 紫色(脯氨酸、羟脯氨酸为黄色) (检验α-氨基)
2、坂口反应 (Sakaguchi reaction) 丙氨酸
α-萘酚+碱性次溴酸钠 红色 (检验胍基 精氨酸有此反应)
3、米隆反应(又称米伦氏反应) HgNO3+HNO3+热 红色 (检验酚基 酪氨酸有此反应,未加热则为白色)
4、Folin-Ciocalteau反应(酚试剂反应) 磷钨酸-磷钳酸 蓝色 (检验酚基 酪氨酸有此反应)
5、黄蛋白反应 浓硝酸煮沸 黄色 (检验苯环 酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸有此反应)
6、Hopkin-Cole反应(乙醛酸反应) 加入乙醛酸混合后徐徐加入浓硫酸 乙醛与浓硫酸接触面处产生紫红色环 (检验吲哚基 色氨酸有此反应)
7、Ehrlich反应 P-二甲氨基苯甲醛+浓盐酸 蓝色 (检验吲哚基 色氨酸有此反应)
8、硝普盐试验 Na2(NO)Fe(CN)2*2H2O+稀氨水 红色 (检验巯基 半胱氨酸有此反应)
9、Sulliwan反应 1,2萘醌、4磺酸钠+Na2SO3 红色 (检验巯基 半胱氨酸有此反应)
10、Folin反应 1,2萘醌、4磺酸钠在碱性溶液 深红色 (检验α-氨基酸)
三、关于氨基酸态氮的测定:(定量分析)1.双指示剂甲醛滴定法2.电位滴定法 另请参阅:
调味料中氨基酸态氮检测具体步骤?急!!!
电位甲醛滴定法【酱油卫生标准的分析方法Method for analysis of hygienic standard of soybean sauce】(第一法甲醛值法)
(一)原理
氨基酸有氨基及羧基两性基团,它们相互作用形成中性内盐,利用氨基酸的两性作用,加入甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出来酸性,用氢氧化钠标准溶液滴定后定量,根据酸度计指示pH值,控制终点。
R—CH—COOH——→R—C—C=O
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NH2 H3N—O
R—CH—COOH+HCHO——→R—CH—COOH
∣ ∣
NH2 NH—CH2OH
R—CH—COOH +NaOH=R—CH—COONa
∣ ∣
NH—CH2OH NH—CH2OH
(二)试剂
1、甲醛(36%):应不含有聚合物。
2、氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]
(三)仪器
1、pHS—25型酸度计:包括标准缓冲溶液和KCL饱和溶液;
2、20mL移液管;3、10mL微量滴定管;4、100mL容量瓶;
5、250mL烧杯;
(四)测定方法
1、吸取5.0mL试样,置于100mL容量瓶中,加水至刻度,混匀,备用。
2、吸取上述稀释液20.00mL置于200mL烧杯中,加水60mL水,插入电极,开动磁力搅拌器,用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2,记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数,(可计算总酸含量)。
3、向上述溶液中准确加入10.0mL甲醛溶液,混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]继续滴定至pH9.2,记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数。
4、取80mL水,先用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2,再加入10.0mL甲醛溶液,混匀,再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]滴定至pH9.2,记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数。
(五)结果计算
试样中氨基酸态氮的含量为:
式中:X—试样中氨基酸态氮的含量,g/100Ml;
V1—测定用试样稀释液加入甲醛后消耗标准碱液的体积,mL;
V2—测定空白试验加入甲醛后消耗标准碱液的体积,mL;
C—氢氧化钠标准溶液的浓度,mol/L;
0.014—与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=1.000mol/L]相当的氮的质量,g;
(六)注意事项
1、加入甲醛后放置时间不宜过长,应立即滴定,以免甲醛聚合,影响测定结果。
2、由于铵离子能与甲醛作用,样品中若含有铵盐,将会使测定结果偏高。
3、计算结果保留两位有效数字。精密度:在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
酱油中氨基酸态氮含量的测定是什么?
食品中的氨基酸组成十分复杂,在一般的常规检验中,多测定食品中氨基酸的总量,即氨基酸态氮的总量,通常采用碱滴定法进行简易测定。
氨基酸含有羧基和氨基,利用氨基酸的两性作用,加入甲醛固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性,用氢氧化钠标准溶液滴定后进行定量,用酸度计测定终点。
蛋白质是一类含氮的高分子化合物,基本组成单位是氨基酸。参加蛋白质合成的氨基酸共有二十多种,其中有9种(赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苏氨酸、组氨酸、蛋氨酸和缅氨酸)人体自身不能合成,必须由食物中供给。
否则人体就不能维持正常代谢的进行,称为必需氨基酸。蛋白质是生命的基础,生命现象是通过蛋白质来体现的。蛋白质是人体组织细胞的重要组成部分,人体重量的18%由蛋白质构成。
试验:
准确吸取酱油5.0ml置于100ml容量瓶中,加水稀释至刻度后摇匀吸取20.0ml置于100ml烧杯中,加水60ml,插入酸度计的指示电极作为参比电极。
开动磁力搅拌器(若是冬季需加热到二十摄氏度左右),再用0.05mol/LNaOH标准溶液滴定酸度计指示Ph-8.2,记录用去氢氧化钠标准使用液的体积(ml)(按总酸计算公式可以计算出酱油的总算含量)。
向上述溶液中准确加入甲醛溶液10ml,摇匀,继续用0.05m01/LNaOH标准溶液滴定滴定至Ph-9.2,记录用去氢氧化钠标准使用液的体积(ml),供计算氨基酸态氮含量用。
酱油中的氨基酸态氮是氨基酸含量的特征指标,含量越高酱油的鲜味越强,质量越好。酱油分两种:
1、酿造酱油(Fermented soy sauce):以大豆和/或脱脂大豆、小麦和/或麸皮为原料,经微生物发酵制成的具有特殊色、香、味的液体调味品。按GB18186-2000要求其理化指标应符合规定。
2、配制酱油(Blended soy sauce)以酿造酱油为主体,与酸水解植物蛋白调味液、食品添加剂等配制而成的液体调味品。按SB10336-2000(国家国内贸易局行业标准)要求其理化指标应符合规定。
氨基酸态氮含量计算公式
氨基酸态氮含量计算公式:m=0.287/0.0769。
总氮和氨氮测定方法不一样,但计算过程是一样的首先绘制标准曲线y=bx+a, 化验室一直都要求r平方大于0.999 曲线才可信,例如测试样品吸光度为0.200 空白值0.021,那么测得样的氨氮值=(0.2-0.021-a)/b还需要除以取样体积。
鉴别方法
氨基酸态氮指的是以氨基酸形式存在的氮元素的含量。氨基酸态氮是判定发酵产品发酵程度的特性指标。该指标不达标,主要是由于生产工艺不符合标准要求,产品配方缺陷或者是产品与已制定指标不匹配等原因造成的。
该指标越高,说明酱油中的氨基酸含量越高,鲜味越好。酱油中氨基酸态氮最低含量不得小于0.4g/100ml。要想买到合适的酱油,首先要看标签。
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