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简述液体调味料氨基酸态氮检测的基本步骤
简述液体调味料氨基酸态氮检测的基本步骤
电位甲醛滴定法【酱油卫生标准的分析方法Method for analysis of hygienic standard of soybean sauce】（第一法甲醛值法）
（一）原理
氨基酸有氨基及羧基两性基团，它们相互作用形成中性内盐，利用氨基酸的两性作用，加入甲醛以固定氨基的碱性，使羧基显示出来酸性，用氢氧化钠标准溶液滴定后定量，根据酸度计指示pH值，控制终点。
R—CH—COOH——→R—C—C=O
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NH2 H3N—O
R—CH—COOH+HCHO——→R—CH—COOH
∣ ∣
NH2 NH—CH2OH
R—CH—COOH +NaOH=R—CH—COONa
∣ ∣
NH—CH2OH NH—CH2OH
（二）试剂
1、甲醛（36%）：应不含有聚合物。
2、氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]
（三）仪器
1、pHS—25型酸度计：包括标准缓冲溶液和KCL饱和溶液；
2、20mL移液管；3、10mL微量滴定管；4、100mL容量瓶；
5、250mL烧杯；
（四）测定方法
1、吸取5.0mL试样，置于100mL容量瓶中，加水至刻度，混匀，备用。
2、吸取上述稀释液20.00mL置于200mL烧杯中，加水60mL水，插入电极，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，记录消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数，（可计算总酸含量）。
3、向上述溶液中准确加入10.0mL甲醛溶液，混匀。再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]继续滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数。
4、取80mL水，先用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]滴定至酸度计指示pH8.2，再加入10.0mL甲醛溶液，混匀,再用氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]滴定至pH9.2，记录加入甲醛后滴定所消耗氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=0.050mol/L]的毫升数。
（五）结果计算
试样中氨基酸态氮的含量为：
式中：X—试样中氨基酸态氮的含量，g/100Ml；
V1—测定用试样稀释液加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL；
V2—测定空白试验加入甲醛后消耗标准碱液的体积，mL；
C—氢氧化钠标准溶液的浓度，mol/L；
0.014—与1.00 mL氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH )=1.000mol/L]相当的氮的质量，g；
（六）注意事项
1、加入甲醛后放置时间不宜过长，应立即滴定，以免甲醛聚合，影响测定结果。
2、由于铵离子能与甲醛作用，样品中若含有铵盐，将会使测定结果偏高。
3、计算结果保留两位有效数字。精密度:在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%
测定氨基酸含量的方法有几种
1)称干重法.可用离心法或过滤法测定.优点：可适用于一切微生物,缺点：无法区别死菌和活菌.
2)比浊法.原理：由于微生物在液体培养时,原生质的增加导致混浊度的增加,可用分光光度计测定.优点：比较准确.
3)测含氮量,大多数微生物的含氮量占干重的比例较一致,根据含氮量再乘以6.25即可测得其粗蛋白的含量.
4)血球计数板法.优点：简便、快速、直观.缺点：结果包括死菌和活菌.
5)液体稀释法.对未知菌样作连续的10倍系列稀释,经培养后,记录每个稀释度出现生长的试管数,然后查MPN表,再根据样品的稀释倍数就可计算其中的活菌含量.优点：可计算活菌数,较准确.缺点：比较繁琐.
6)平板菌落计数法.取一定体积的稀释菌液涂布在合适的固体培养基,经培养后计算原菌液的含菌数.优点,可以获得活菌的信息.缺点：操作繁琐,需要培养一定时间才能获得,测定结果受多种因素的影响.
检验氨基酸用什么方法？
1.茚三酮反应，氨基酸与其发生反应缩合成蓝色物质。除开脯氨酸和羟脯氨酸，他们与其反应生成黄色衍生物。
2.桑格反应，氨基酸与其反应会生成黄色的2,4-二硝基氨基酸，可以用于鉴定多肽或蛋白质的N端氨基酸。
3.艾德曼反应（DNFB反应），即氨基酸与苯异硫氰酸反应生成相应的苯氨基硫甲酰氨基酸。
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