氨基酸分析仪说明书(氨基酸分析仪的原理)

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氨基酸分析仪原理

层析和色谱。不同的氨基酸在相同的流动相中迁移率不同,根据HPLC的保留时间判断氨基酸性质,而峰面积反应了浓度。

现在的质谱还可以对短的肽进行氨基酸分析,拼接后得到肽的序列。

氨基酸自动分析仪测定蛋白质中氨基酸组成的原理?

采用经典的阳离子交换色谱分离、茚三酮柱后衍生法,对蛋白质水解液及各种游离氨基酸的组分含量进行分析。仪器基本结构同普通HPLC相似,但针对氨基酸分析进行了细节优化(例如氮气保护、惰性管路、在线脱气、洗脱梯度及柱温梯度控制等等)

通常细分为两种系统:蛋白水解分析系统(钠盐系统)和游离氨基酸分析系统(锂盐系统),利用不同浓度和pH值的柠檬酸钠或柠檬酸锂进行梯度洗脱。其中钠盐系统一次最多分析约25种氨基酸,速度较快,基线平直度好;锂盐系统一次最多分析约50种氨基酸,速度较慢,基线一般不如钠盐系统好。

分析效果:从目前已知的氨基酸分析方法比较来看,除灵敏度(即最低检测限)比HPLC柱前衍生方法稍低以外(HPLC:0.5pmol;氨基酸分析仪:10pmol),其他如分离度、重现性、操作简便性、运行成本等方面,都优于其他分析方法。

氨基酸分析仪的工作原理是什么?

不同的氨基酸结构不同,可通过红外光谱,核磁共振氢谱等方法识别各个酸特定结构,江苏高二化学里有.

氨基酸自动分析仪的工作原理?还有这样运用,作用是什么?

氨基酸分析仪是属于色谱类,和高效液相有些类似,是利用分离柱分离氨基酸,氨基酸与茚三酮在高温下发生衍生反应,生成有色的衍生物,通过光度计检测有色衍生物来对氨基酸进行定性定量分析。

氨基酸分析仪说明书(氨基酸分析仪的原理)

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优点 1.分析可以再设备普通的实验室里进行

2.能够分析大量的样品。因为通过仔细的计划,好几批试样可以同时分析以及为分析

做好准备

3.原始数据能够容易的处理以供在计算机中进一步求值

4.检测极限也从最初的u mol,级提高到p mol 级

5.氨基酸不用柱前衍生,直接上样进行分析,操作步骤简单,故是迄今氨基酸定性、定量分析中应用最广泛的方法之一。柱后衍生试剂除茚三酮外,还有可用荧光检测的邻苯二甲醛,使检测灵敏度得以提

高,已达5-10 mol

缺点:

(1)由于仪器结构复杂,造成价格昂贵;

(2)离子交换树脂易压缩,流动相流速的加快不与压力的增加成比例,故测定时间相对较长;

(3)氨基酸经离子交换柱分离,在柱后与水合茚三酮衍生剂混合进行反应,势必造成柱后扩散比较大,峰形变宽,分辨率降低;

(4)有些柱后衍生剂如邻苯二甲醛虽能用灵敏的荧光检测,但不能与亚氨基反应,故不能检测脯氨酸。

全自动氨基酸分析仪的操作方法

测定样品中各种游离氨基酸含量,可以除去脂肪杂质后,直接上柱进行分析。

测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解,使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。 经过处理后的样品上柱进行分析。上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵敏度来确定。一般为每种氨基酸0.1μmol 左右(水解样品干重为0.3mg 左右)。测定必须在pH5~5.5、100℃下进行,反应进行时间为10~15min,生成的紫色物质在570nm 波长下进行比色测定。而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。做一个氨基酸全分析一般只需1h 左右,同时可将几十个样品一起装入仪器,自动按序分析,最后自动计算给出精确的数据。仪器精确度在±1~3%。用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图

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