本文介绍了在越南宁顺省ShrimpVet孵化场进行的研究结果。本试验的目的是评估在南美白对虾 ( Litopenaeus vannamei ) 虾苗 (PL) 的孵化场生产中。应用两种商业益生菌(BiOWiSH?AquaFarm和BiOWiSH?MultiBio 3PS)处理方案的有效性,比较一种新的虾苗生产方案,仅依靠换水来控制无机氮、废弃有机物和病原体。
一、实验准备和安排
1、在试验中,有两个研究组,处理组1 (T1) 是对照组,遵循以前的孵化场生物安全方案,没有采用的益生菌。仅使用换水的方法,维持虾苗饲养池中的水质,每日换水量为15%至20%。孵化场生物安全包括:水处理、孵化场消毒、人员卫生,以及活体和新鲜饲料的消毒。
2、处理组2 (T2) 使用了两种商业益生菌:BiOWiSH?AquaFarm用于控制无机氮和抑制水体中的弧菌,BiOWiSH?MultiBio 3PS应用于饲料,以改善肠道健康。T2中的换水方案与T1相同,两个处理组之间的唯一区别是T2中使用了益生菌。
3、试验中使用的南美白对虾无节幼体由ShrimpVet提供,之前已对各种虾病进行筛查,包括:白斑综合征病毒 (WSSV)、Taura综合征病毒 (TSV)、传染性肌坏死病毒 (IMNV)、急性肝胰腺坏死病 (AHPND)和使用聚合酶链式反应 (PCR) 技术对EHP进行检测。
5、池中使用的海水通过砂滤器和网袋过滤器(1.0 μm)过滤,然后泵入蓄水池进行氯化初步消毒(30ppm次氯酸钠24小时)。在氯化和颗粒沉降后,水通网袋过滤器 (0.5 μm) 进行过滤,然后使用紫外线 (UV) 消毒,并泵入处理过的海水蓄水池。在使用海水之前,检查余氯:如果氯仍然存在,则应用硫代硫酸钠,每ppm的余氯使用1ppm的硫代硫酸盐。
6、包括温度、溶解氧 (DO)、pH、盐度、总氨氮 (TAN) 和亚硝酸盐氮 (NO2 -N) 在内的水质参数保持在虾正常生长的最佳范围内。水质分析设备包括:溶解氧与电子仪表、pH值与手持式传感器、盐度与折光仪、总氨氮和亚硝酸盐氮与比色测试套件。收集水样用于胰蛋白胨大豆琼脂 (TSA)、平板计数琼脂 (PCA) 和硫代硫酸柠檬酸盐胆汁盐蔗糖琼脂 (TCBS) 上的细菌分析。
T1孵化池视图(左);T2孵化池视图(右)。
7、在生物安全条件下,孵化场还生产了活微藻(Thalassiosira pseudonana )和活卤虫,卤虫在喂食前用甲酸消毒。
技术人员在试验期间检查发育中的幼虾的大小变化和肝胰腺状况。
二、研究结果和讨论
1、试验期间监测的水质参数在南美白对虾养殖可接受的水平内。对于T1(对照组)组,平均值如下:水温为30.4摄氏度(29.8-33 摄氏度);溶解氧6.5mg/L(6.2–7.1mg/L);pH值8.0 (7.9–8.1); 氨氮为1.8(0.0–2.0 mg/L);和亚硝酸盐为0、
对于T2组:温度30.3摄氏度(29.8–33.4 摄氏度);溶解氧6.7 mg/L (6.1–7.0 mg/L);pH值8.0 (7.7–8.2);氨氮为1.4(0.0–2.0 毫克/升);和亚硝酸盐0mg/L。应该注意的是,T2组的氨氮比T1组低了22.2%。
图1:每个池子每天的饲料量;X轴显示每天的幼虫阶段(N5至PL10)。
2、我们在试验期间进行的细菌分析,图2显示了对TSA和PCA琼脂进行两种处理的结果。T2的两种琼脂上的细菌计数均高于T1。每天使用益生菌很可能会增加T2中的细菌数量。PCA计数可能低于TSA计数,因为PCA琼脂缺乏挑剔细菌所需的营养。PCA琼脂处理之间的巨大差异意味着,每种处理组都有不同的细菌种群。
图2:TSA琼脂上的异养细菌(左)和PCA琼脂上的细菌菌落(右)的两种结果。
3、图3显示了两种处理的黄色和绿色弧菌计数。黄色弧菌计数相似。一般来说,黄色弧菌不会致病。T1中的绿色弧菌计数大于T2,许多绿色弧菌可能是致病的。
图3:两种处理组在TCBS琼脂上的黄色和绿色弧菌计数。
4、图4中的图表将异养细菌总数与绿色弧菌计数进行了比较。在T1中,总异养细菌和绿色弧菌之间的差异约为2倍。但是在T2的大部分试验中,异养细菌总数和绿色弧菌之间的差异约为3倍 。这意味T2组中,绿色弧菌可以被异养细菌抑制。
图4:T1和T2的总异养细菌计数与绿色弧菌计数的比较。
5、在孵化场生产期间,T1的存活率为60.57%,而T2的存活率为70.53%。根据目前孵化场的产量,这种存活率的增加将相当于每年额外增加1.48亿尾虾苗。
图5:孵化场生产期间,T1和T2的虾苗存活率。
6、当孵化池收获时,使用每个池的30个虾苗样本,对不同类别的健康状况进行评估。评分范围从0到10(数值越高越好),结果如表1所示。T2组在每个类别中的得分都较高,虽然虾苗的大小相同,但是T2组虾苗健康状况的改善,可能归因于生存率的提高。
表1. 基于所评估的各种类别的后期幼体健康评估。
7、AHPND疾病挑战试验在越南胡志明市的ShrimpVet实验室进行。两组虾苗在8升水箱中进行了14天的零换水攻击,结果如图6所示。阴性对照组存活率为100%,表明水箱没有副溶血弧菌,所以不会导致死亡。T1组虾苗的存活率为37.6%,而T2存活率为48.7%,虾苗健康状况的改善,会增强抗病能力。
图6:AHPND挑战,三组虾苗存活率。
三、结论
T2组中的健康分析比T1组得分高出 39.7%,T2的AHPND疾病挑战存活率也增加了29.6%,表明虾苗抗病性增加。在T2组中,虾的总体存活率提高了16.4%。这些结果表明,该试验中使用益生菌增加了虾孵化场的产量,并提高了虾苗的质量和抗病性,在虾苗的孵化当中,益生菌是虾苗孵化的利器。
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