肥料游离氨基酸测定方法(植物组织中游离氨基酸总量的测定)

游离氨基酸的测定实验报告

实验一：游离氨基酸测定实验学时：3学时实验类型：验证实验要求：必修一、实验目的1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。二、实验内容使用甲醛滴定法测定游离氨基酸三、实验原理氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定，需使这些含氮化合物（包括有机含氮化合物）都转化为氨态氮，然后进行测定。但可以用甲醛法测量。在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的α-氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚酞批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮R-NH3+→H++R-NH2R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)24 NH4++ 6 HCHO==(CH2)6N4H++ 3 H++ 6 H2O滴定的结果表示游离a—氨基的含量，其精确度可达理论量的90%。如果样品中只某一种已知的氨基酸，从甲醛法结果可求得该氨基酸的含量。如果样品中是多种氨基酸的混合物(如蛋白水解液)，则测定结果不能作为氨基酸的定量依据。一般常用此法测定蛋白质水解程度，随着水解程度的增加滴定值增加，当水解完全后，滴定值即保持恒定。甲醛滴定法采用的甲醛浓度为2.0-3.0mol/L，即滴定后最终浓度为6%-9%。四、实验组织运行要求集中授课形式五、实验条件1．试剂(1)40％中性甲醛溶液:在50mL 36%~ 37%甲醛中加入5滴5g/L酚酞乙醇溶液，然后用0.2mol/L NaOH溶液滴定到微红(使用前需重新中和)(2)酚酞指示剂: 5g/L酚酞的50%乙醇溶液(3)0.01mol/L氢氧化钠标准溶液(4)10%(体积分数)乙酸溶液2．玻璃仪器⑴50ml容量瓶⑵20ml移液管⑶碱式滴定管⑷50ml量杯⑸250ml三角瓶六、实验步骤(1)样品处理称取试样0.2g(准确至1mg)，置入研钵中，加5ml 10%乙酸溶液研磨至均匀，用水转移到50mL容量瓶中并定容至刻度，摇匀、过滤(弃去最初部份溶液)。

(2)样品滴定在三角瓶中加入2mL样品滤液，加水4mL，3滴酚酞指示剂，摇匀后用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定到微红色。然后加入2mL中性甲醛溶液，摇匀，放置片刻，再用0.01mol/L NaOH标准溶液滴定回到微红色中点，记下甲醛加入后样品消耗NaOH标准溶液的体积。同样，取6mL水按以上操作做空白实验。七、计算α-氨基氮含量(%)=(V-V0)×c×0.014×(1/2)×50×(1/m)×100式中： V—加甲醛后样品消耗NaOH标准溶液体积(mL)V0—加甲醛后空白消耗NaOH标准溶液体积(mL)c—NaOH标准溶液的浓度(mol/L)0.014—消耗1ml 1mol/L NaOH标准溶液相当于氮的质量(g)2—吸取样品滤液的体积(mL)50—样品稀释液的总体积(mL)m—称取试样质量(g)八、讨论(1)甲醛法中除氨态氮外别的氮也能起反应(如铵盐、酰胺等)，故误差较大。另外由于各种氨基酸的等电点不同，故确定一个合适的滴定终点较为困难。(2)脯氨酸与甲醛作用后，生成不稳定化合物，致使滴定结果偏低，酪氨酸含有酚基，滴定时要消耗一定的碱，可使滴定结果偏高。溶液中若有氨存在也可与甲醛反应，使结果偏高。九、思考题若溶液中有铵存在测定结果会偏高还是偏低十、实验报告

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实验一游离氨基酸测定

实验一：游离氨基酸测定

实验学时：3学时

实验类型：验证

实验要求：必修

一、实验目的

1、掌握甲醛法测定游离氨基酸的测定原理和方法。

二、实验内容

使用甲醛滴定法测定游离氨基酸

三、实验原理

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氨基酸中的NH2基的pK值常在9.0以上，不能和NaOH标准溶液直接滴定，需使这些含氮化合物（包括有机含氮化合物）都转化为氨态氮，然后进行测定。但可以用甲醛法测量。在pH中性和常温条件下，甲醛迅速与氨基酸中的α-氨基相互作用，使滴定终点移至pH值9.0左右，可以用酚酞批示剂，以NaOH标准溶液来滴定NH3+基上的H+,每释放一个氢离子，就相当于有一个氨基氮

R-NH3+→H++R-NH2

R-NH2+2HCHO→R-N(CH2H)2

4 NH4++ 6 HCHO==(CH2)6N4H++ 3 H++ 6 H2O

植物组织中游离氨基酸总量的测定

植物组织中游离氨基酸总量的测定如下：

测定植物体内游离氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。

【原理】

游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。

【仪器设备】

分光光度计；电子天平；容量瓶25ml或50ml 3个；漏斗（直径6厘米）3个、滤纸适量；20ml刻度试管7支；移液管0.5ml 3支、5ml 1支；试管架；玻棒；吸耳球；剪刀；移液管架；橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）；吸水纸；擦镜纸适量；电炉；水浴锅（含铁丝筐）。

【试剂】

1. 3%茚三酮试剂

称3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里，贮于棕色瓶中。此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10天。

2.氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：

（1）NaCN贮备液0.01mol/L（490mg/L）。

（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。

取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。

3.标准氨基酸精确称取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg（或α-丙氨酸8.9mg）溶于10%的异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5μmol，或氨基氮7μg。

4. 95%乙醇；5.异丙醇（分析纯）。

氨基酸含量测定

1.原理

在用盐酸水解蛋白质的过程中，胱氨酸易被破坏，现多采用过甲酸氧化法将蛋白质中的胱氨酸及半胱氨酸氧化成半胱磺酸，其反应如下：

SH NH2 O SO3H NH2 O

CH2 CH COOH+3H C OOH CH2 CH COOH+3H C OH

半胱氨酸过甲酸半胱磺酸甲酸

生成的半胱磺酸可在氨基酸自动分析仪上进行测定，与标准半胱磺酸比较，计算其含量。

2.适用范围

参照中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所编写的食物营养成分测定法第三版。适用于食物中胱氨酸的测定。

3.仪器

水解瓶：耐压螺盖玻璃管或硬质试管，体积20～30mL，用去离子水冲净并烘干，电热减压蒸发器。

4.试剂

过甲酸：取9mL分析纯甲酸加入1mL30%过氧化氢混合，在室温放置2小时以上。

5.操作步骤

5.1过甲酸氧化：称取一定量的食物样品置于水解瓶中，使样品含蛋白质在5～10mg，加入1mL过甲酸试剂，在室温放置3小时。加1mL乙醇终止氧化。将样品瓶置于电热减压器中，于45℃减压蒸干，用1mL去离子水淋洗瓶壁，再蒸干，反复3次，以除去过甲酸。

5.2盐酸水解：同食物中氨基酸（16种）测定方法

5.3在Bekman6300氨基酸自动分析仪上，在注文50℃时用pH3.25柠檬酸缓冲液洗脱，半胱磺酸的出峰时间约在1.78分钟。

6.计算

上机样品液（50μl）中半胱磺酸量=

上机标准液中半胱磺酸量（nmol）×样品峰面积

半胱磺酸标准峰面积

100g样品中胱氨酸mg数=

上机样品中半胱磺酸量（nmol）×D×M×100

W×E×106×2

式中

D：样品稀释倍数

M：胱氨酸分子量（ng）

W：称样量（g）

E：上机时的进样量（此处为50μl）

哪些肥料属于氨基酸肥料

酸性肥料主要有：过磷酸钙、硫酸铵、磷酸一铵、硝酸铵、硝酸钙、硫铵、氯化钾、硫酸钾、硫酸氨等等。化肥中硫酸亚铁、硫酸铜溶液、过磷酸钙、农家肥中鸡粪、羊粪蛋都是不错的酸性肥料。连碧卡含氨基酸水溶肥、腐植酸水溶肥都是呈弱酸性。

拓展资料：

化学肥料

土壤中的常量营养元素氮、磷、钾通常不能满足作物生长的需求，需要施用含氮、磷、钾的化肥来补足。而微量营养元素中除氯在土壤中不缺外，另外几种营养元素则需施用微量元素肥料。化肥一般多是无机化合物。凡只含一种可标明含量的营养元素的化肥称为单元肥料，如氮肥、磷肥、钾肥等。凡含有氮、磷、钾三种营养元素中的两种或两种以上且可标明其含量的化肥称为复合肥料或混合肥料。品位是化肥质量的主要指标。它是指化肥产品中有效营养元素或其氧化物的含量百分率。

肥料农业作用

中国是一个人口众多的国家，粮食生产在农业生产的发展中占有重要的位置。通常增加粮食产量的途径是扩大耕地面积或提高单

位面积产量。根据中国国情，继续扩大耕地面积的潜力已不大，虽然中国尚有许多未开垦的土地，但大多存在投资多、难度大的问题。这就决定了中国粮食增产必须走提高单位面积产量的途径。

施肥不仅能提高土壤肥力，而且也是提高作物单位面积产量的重要措施。化肥是农业生产最基础而且是最重要的物质投入。据联合国粮农组织（仅供参考）统计，化肥在对农作物增产的总份额中约占40%~60%。中国能以占世界7%的耕地养活了占世界22%的人口，可以说化肥起到举足轻重的作用。

含氨基酸水溶肥料标准

含氨基酸水溶肥料

《含氨基酸水溶肥料》NY1429-2010和《水溶肥料汞、砷、镉、铅、铬的限量要求》NY1110-2010。

含氨基酸水溶肥料(微量元素型)登记技术指标